细胞冻存的原理

细胞冻存的基本原理是利用低温环境抑制细胞的新陈代谢，使细胞进入一种“休眠”状态。在低温条件下，细胞的生物活动几乎停止，从而实现长期保存。然而，细胞在冷冻过程中可能会因为细胞内外水分结冰形成冰晶而受损。为了避免这种情况，通常在冻存液中加入冷冻保护剂，如甘油或二甲基亚砜（DMSO），这些物质可以降低溶液的冰点，减少冰晶的形成，从而保护细胞。

细胞冻存的步骤

细胞收集：收获健康、生长状态良好且处于对数生长期的细胞。对于贴壁细胞系，尽可能收获细胞汇合度接近80-90％的细胞。

消化细胞：用胰蛋白酶/EDTA 消化贴壁或半贴壁细胞，并用至少相当于胰蛋白酶体积的新鲜培养基重悬细胞。悬浮细胞系可直接使用。

配制冻存液：根据细胞类型，配制含有适当浓度的冷冻保护剂和血清的冻存液。

细胞悬液制备：在冷冻培养基中以每毫升2-4x106个细胞的浓度重悬细胞。

分装：将细胞等分移液到贴有标签的冻存管中，标签须注明细胞名称、传代数、细胞浓度和日期等信息。

冷冻：按照一定的降温速率将细胞冻存管放入-80℃冰箱或液氮罐中，常见的降温速率为每分钟1-3℃。

长期储存：将冻存管转移到液氮罐的气相中（-196℃）并记录位置。

细胞冻存的注意事项

•  确保细胞在冻存前未受污染，且处于健康状态。

•  选择合适的冷冻保护剂，并按照推荐的浓度使用。

•  控制好细胞的密度和冻存液的体积。

•  冻存管应正确标记，避免信息错误。

•  冻存过程中避免快速的温度变化，以防细胞损伤。

Sigma-Aldrich细胞冻存明星产品D2650二甲基亚砜（DMSO）产品，由于包装工艺和包装地点的差异，其玻璃安瓿瓶包装的D2650-5X5ML和D2650-5X10ML正式变更为全新货号D2653-5X5ML和D2653-5X10ML，从而与棕色瓶包装的D2650-100ML的货号区分（D2650-100ML的货号和其他生产相关条件均没有任何变化）。新货号所使用的原材料、包装材料、灌装工艺以及生产地点，与之前D2650-5X5ML和D2650-5X10ML所使用的完全相同。

详见如下声明：

科普小知识

D2653-5X5ML和D2653-5X10ML采用的安瓿瓶（Ampules）采用火焰熔封（Flame Sealed）的包装形式具有多方面的优势，主要体现在以下几个方面：

密封性极佳：火焰熔封是通过高温使安瓿瓶口玻璃融化并密封，能够形成一个完全密闭的空间，确保内部所装药品或试剂等与外界空气、水分、微生物等完全隔离，有效防止药品被氧化、受潮、变质，保证药品在储存和运输过程中的稳定性和质量，延长内容物的有效期。

无菌保障：在火焰熔封前，安瓿瓶通常会经过严格的清洗和高温灭菌处理，而火焰熔封过程本身也具有一定的杀菌作用，进一步确保了包装内部的无菌环境，最大程度减少内容物被微生物污染的风险，特别适合包装对无菌要求极高的注射剂、疫苗等药品。

化学稳定性好：安瓿瓶一般采用硼硅玻璃等材质，具有很高的化学稳定性，不易与所装的药品或试剂发生化学反应，不会影响内容物的性质和疗效。火焰熔封不会改变玻璃的化学性质，能始终保持对内容物的良好兼容性，可安全地用于包装各种化学性质的药品或试剂。