一、产品概述Epigenase m6A 甲基化酶活性/抑制比色法检测试剂盒由Cytoskeleton推出艾美捷代理它是一套完整的优化缓冲液与试剂组合专用于定量检测总 m6A 甲基化酶甲基转移酶的活性或抑制效果。该试剂盒适用于从哺乳动物、植物、真菌及细菌等多种物种来源的样本包括但不限于培养细胞、新鲜组织及冷冻组织可使用核提取物或纯化的 m6A 甲基化酶如 METTL3/METTL14作为输入材料。二、核心优势与特点特性 | 描述快速 | 比色法检测操作步骤简便整个流程可在4 小时内完成稳健 | 创新的试剂盒组成使背景信号极低检测简单、准确、可靠且一致便捷 | 兼容细胞/组织核提取物和纯化蛋白支持体内外抑制效应检测灵敏且特异 | 新型检测原理直接识别 m6A 甲基化酶转化的终产物特异性优于副产物检测法最低可检测2 µg 核提取物或50 ng 纯化酶定量 | 提供检测标准品可对 m6A 甲基化酶的比活性进行绝对定量灵活 | 条板式微孔板格式支持手动或高通量分析三、背景信息N6甲基腺苷m6A 是真核生物 RNA 分子上最常见、最丰富的修饰也存在于原核生物和病毒中。近期研究发现DNA m6A 同样存在于多细胞真核生物如秀丽隐杆线虫、黑腹果蝇以及高等真核生物包括植物、小鼠和人类细胞中。m6A 在调控以下生物学过程中发挥关键作用DNA 复制与损伤修复RNA 剪接与转座转录调控与细胞防御在人类细胞中m6A 修饰由甲基转移酶“写入器” 催化完成包括 METTL3/METTL14、WTAP、RBM15/15B 和 KIAA1429 等而去除修饰则由α酮戊二酸αKG和 Fe2 依赖的去甲基酶“擦除器” 完成如 FTO、ALKBH5 和 TET 样酶。研究表明m6A 甲基化酶与去甲基化酶在发育、代谢、生育及多种疾病包括癌症和病毒感染的发病机制中扮演重要角色。DNA/RNA 上的动态可逆 m6A 修饰被视为一种具有深远生物学意义的新型表观遗传标记。m6A 修饰上调可增强病毒复制促进癌症生长。m6A 修饰下调首次在人类癌细胞和组织中被发现与正常对照相比。四、检测原理与流程本试剂盒采用比色法检测总 m6A 甲基化酶活性/抑制核心原理如下1.底物包被独特的 m6A 底物被稳定包被于条板微孔中。2.甲基化反应活性 m6A 甲基化酶与底物结合并对底物中的 m6A 位点进行甲基化。3.免疫识别未被去甲基化的 m6A 位点可被高亲和力的抗 m6A 抗体特异性识别。4.信号增强与定量加入增强液放大免疫信号通过 ELISA 样显色反应利用酶标仪进行比色定量。五、检测流程概览总时长 ≤4 小时1.样本准备提取核蛋白或稀释纯化酶至适当浓度。2.甲基化反应将样本加入包被有 m6A 底物的微孔中室温孵育 90–120 分钟。3.抗体结合加入抗 m6A 抗体孵育 60 分钟。4.信号增强加入增强液孵育 30 分钟。5.显色与读数加入显色底物避光孵育 10–15 分钟终止后于 450 nm 读取吸光度。6.定量计算利用试剂盒提供的标准品绘制标准曲线计算样本的比活性单位pmol/min/mg。六、应用场景体内外 m6A 甲基化酶抑制剂筛选使用核提取物评估化合物在细胞内的抑制效果使用纯化酶进行体外 IC50 测定。不同生理或病理状态下 m6A 甲基化酶活性比较如癌症 vs 正常组织、药物处理 vs 对照。基因敲低/过表达对甲基化酶活性的影响结合 RNAi 或 CRISPR 技术。不同物种 m6A 甲基化酶的功能保守性研究从细菌到哺乳动物的宽泛适用性。七、注意事项与操作要点1.样本保存核提取物建议分装后于 80°C 保存避免反复冻融。纯化酶按供应商说明保存。2.背景控制务必设置无酶对照用缓冲液替代样本以扣除背景信号。3.标准曲线每批次实验均应重新制备标准曲线确保定量准确性。4.高通量格式条板可拆卸可根据样本数量选择所需条数剩余板条密封保存于 4°C。5.干扰物质核提取物中的高浓度 EDTA、DTT 或去垢剂可能抑制甲基化酶活性建议使用试剂盒提供的专用缓冲液进行透析或稀释。相关产品N6methyladenosine (m6A) Polyclonal AntibodyEpiQuik m6A RNA Methylation Quantification Kit (Colorimetric)Epigenase m6A Demethylase Activity/Inhibition Assay Kit (Colorimetric)